Principi sperimentali del metodo di conteggio diretto della microscopia microbica
Il conteggio diretto al microscopio utilizzando un emocitometro è un metodo comunemente utilizzato per contare i microrganismi. Il vantaggio di questo metodo è che è intuitivo e veloce. Posizionare la sospensione batterica (o sospensione di spore) opportunamente diluita nella camera di conteggio tra il vetrino e il coprioggetto dell'emocitometro e contare al microscopio. Poiché il volume della camera di conteggio è fisso (0,1 mm2), può essere convertito nel numero totale di microrganismi per unità di volume in base al numero di microrganismi osservati al microscopio. Poiché questo metodo conta il numero totale di batteri vivi e morti, è anche chiamato metodo della conta batterica totale.
Un emocitometro è solitamente uno scivolo speciale con quattro fessure che formano tre piattaforme. La piattaforma centrale è divisa in due metà da una breve scanalatura orizzontale. C'è una griglia quadrata incisa sulla piattaforma su ciascun lato. Ogni griglia quadrata è divisa in nove grandi quadrati. La grande piazza al centro è la sala di conteggio. Il conteggio dei microrganismi avviene nella camera di conteggio. La struttura dell'emocitometro è mostrata nella Figura Ⅷ-1.
La scala della camera di conteggio ha generalmente due specifiche. Uno è un quadrato grande diviso in 16 quadrati medi, e ogni quadrato medio è diviso in 25 quadrati piccoli (Figura Ⅷ-2); l'altro è una grande piazza. La griglia quadrata è divisa in 25 quadrati medi e ogni quadrato medio è diviso in 16 quadrati piccoli (Figura VIII-1, C). Ma non importa che tipo di tabellone di conteggio sia, il numero di quadrati piccoli in ogni quadrato grande è lo stesso, cioè 16×25=400 quadrati piccoli, come mostrato nella Figura Ⅷ-2.
La lunghezza del lato di ciascun quadrato grande è 1 mm, quindi l'area di ciascun quadrato grande è 1 mm2. Dopo aver coperto il vetro di copertura, l'altezza tra il vetrino e il vetro di copertura è 0,1 mm, quindi il volume della camera di conteggio è 0,1 mm3.
Quando si conta, di solito si conta il numero totale di batteri in cinque quadrati medi, quindi si trova il valore medio di ciascun quadrato centrale, quindi si moltiplica per 16 o 25 per ottenere il numero totale di batteri in un quadrato grande, quindi si calcola Converti in numero totale di batteri in 1 ml di soluzione batterica.
