Differenze tra microscopia a fluorescenza e microscopia confocale
microscopio a fluorescenza
1. Il microscopio a fluorescenza utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per irradiare l'oggetto ispezionato, facendolo emettere fluorescenza e quindi osservare la forma e la posizione dell'oggetto al microscopio. La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento, il trasporto, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze all'interno delle cellule. Alcune sostanze nelle cellule, come la clorofilla, possono fluire quando esposte alle radiazioni ultraviolette; Esistono anche alcune sostanze che non possono emettere fluorescenza, ma possono anche emettere fluorescenza se colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti e irradiati con luce ultravioletta. La microscopia a fluorescenza è uno degli strumenti per la ricerca qualitativa e quantitativa su tali sostanze.
2. Principio del microscopio a fluorescenza:
(A) Fonte luminosa: la sorgente luminosa emette luce di varie lunghezze d'onda (dall'ultravioletta all'infrarosso).
(B) Fonte della luce del filtro di eccitazione: trasmissione della luce di una lunghezza d'onda specifica che può causare fluorescenza nel campione, bloccando la luce inutile per una fluorescenza eccitante.
(C) Spediosi fluorescenti: solitamente colorati con pigmenti fluorescenti.
(D) Filtro bloccante: trasmette selettivamente la fluorescenza bloccando la luce di eccitazione che non viene assorbita dal campione e anche alcune lunghezze d'onda nella fluorescenza vengono trasmesse selettivamente. Un microscopio che utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per rendere l'oggetto illuminato emettere fluorescenza. Il microscopio elettronico è stato assemblato per la prima volta da Knorr e Haruska a Berlino, in Germania, nel 1931. Questo microscopio utilizza travi di elettroni ad alta velocità anziché travi di luce. A causa della lunghezza d'onda molto più breve del flusso di elettroni rispetto alle onde luminose, l'ingrandimento di un microscopio elettronico può raggiungere 8 0 0000 volte, con un limite di risoluzione minima di 0,2 nanometri. Il microscopio elettronico a scansione, che è stato utilizzato per la prima volta nel 1963, consente alle persone di vedere le piccole strutture sulla superficie degli oggetti.
3. Ambito dell'applicazione: utilizzato per ingrandire le immagini di piccoli oggetti. Generalmente usato per osservazioni di biologia, medicina, particelle microscopiche, ecc.
microscopio confocale
1. Il microscopio confocale aggiunge una mezza lente semi riflettente al percorso della luce riflessa, che devia la luce riflessa che è passata attraverso l'obiettivo in altre direzioni. Nel suo punto focale, c'è un deflettore con un foro stenopeico situato nel punto focale e dietro il deflettore c'è un tubo fotomultiplicatore. Si può immaginare che la luce riflessa prima e dopo il focus della luce di rilevamento non può essere focalizzata sul piccolo foro attraverso questo sistema confocale e sarà bloccata dal deflettore. Quindi il fotometro misura l'intensità della luce riflessa nel punto focale.
2. Principio: i microscopi ottici tradizionali usano le sorgenti della luce di campo e l'immagine di ciascun punto sul campione è influenzata dalla diffrazione o dalla luce sparsa dai punti vicini; Il microscopio confocale a scansione laser utilizza un raggio laser per illuminare un foro stenopeico e formare una sorgente di luce punto per scansionare ogni punto sul piano focale del campione. Il punto illuminato sul campione viene imaged al foro stenopeico di rilevamento e viene ricevuto punto per punta o linea da un tubo fotomultiplicatore (PMT) o un dispositivo di accoppiamento a freddo (CCCD) dopo aver rilevato il foro stenopeico, formando rapidamente un'immagine di fluorescenza sullo schermo del monitor del computer. Il foro stenopeico di illuminazione e il foro stenopeico di rilevamento sono coniugati rispetto al piano focale della lente oggettiva. I punti sul piano focale sono contemporaneamente focalizzati sul foro stenopeico di illuminazione e sul foro stenopeico di emissione, e i punti al di fuori del piano focale non saranno ripresi al foro stenopeico di rilevamento. L'immagine confocale risultante è la sezione ottica del campione, superando lo svantaggio delle immagini sfocate nei microscopi generali.
