Differenza tra microscopio a luce ordinaria e microscopio a fluorescenza
Microscopio ottico: è uno strumento ottico che utilizza principi ottici per ingrandire e visualizzare piccoli oggetti che non possono essere risolti dall'occhio umano, in modo che le persone possano estrarre informazioni sulla microstruttura.
Microscopio a fluorescenza: il microscopio a fluorescenza utilizza la luce ultravioletta come sorgente luminosa per irradiare l'oggetto sottoposto a ispezione per fargli emettere fluorescenza, quindi osservare la forma e la posizione dell'oggetto al microscopio. La microscopia a fluorescenza viene utilizzata per studiare l'assorbimento e il trasporto di sostanze nelle cellule, la distribuzione e la localizzazione delle sostanze chimiche, ecc. Alcune sostanze nelle cellule, come la clorofilla, possono fluorescenza dopo essere state irradiate dai raggi ultravioletti; sebbene alcune sostanze di per sé non possano emettere fluorescenza, possono anche emettere fluorescenza dopo essere state colorate con coloranti fluorescenti o anticorpi fluorescenti dopo essere state irradiate da raggi ultravioletti. La microscopia a fluorescenza è uno degli strumenti per la ricerca qualitativa e quantitativa su tali sostanze.
Un microscopio ottico è generalmente costituito da un tavolino, un sistema di illuminazione a faretto, una lente obiettivo, un oculare e un meccanismo di messa a fuoco. Modificando il metodo di illuminazione, il sistema di illuminazione a faretto può ottenere diversi metodi di osservazione come punti di oggetto scuro su sfondo chiaro (detta illuminazione in campo chiaro) o punti di oggetto chiaro su sfondo scuro (detta illuminazione in campo scuro), in modo da scoprire meglio e osservare le microstrutture in diverse situazioni.
I microscopi a fluorescenza differiscono dai microscopi ordinari nei seguenti modi:
1. Il metodo di illuminazione è solitamente episcopico, ovvero la sorgente luminosa viene proiettata sul campione attraverso la lente dell'obiettivo;
2. La sorgente luminosa è luce ultravioletta, la lunghezza d'onda è più breve e la risoluzione è superiore a quella dei normali microscopi;
3. Sono presenti due filtri speciali, quello davanti alla sorgente luminosa viene utilizzato per filtrare la luce visibile e quello tra l'oculare e la lente dell'obiettivo viene utilizzato per filtrare i raggi ultravioletti per proteggere gli occhi umani.
Il microscopio a fluorescenza è anche un tipo di microscopio ottico, la differenza principale è che la lunghezza d'onda di eccitazione dei due è diversa. Ciò determina la differenza tra il microscopio a fluorescenza e il normale microscopio ottico in termini di struttura e utilizzo.
La microscopia a fluorescenza è uno strumento essenziale nella citochimica immunofluorescente. È composto da componenti principali come sorgente luminosa, sistema di piastre filtranti e sistema ottico. Consiste nell'utilizzare una determinata lunghezza d'onda della luce per eccitare il campione a emettere fluorescenza e osservare l'immagine fluorescente del campione amplificando la lente dell'obiettivo e il sistema oculare.
