Determinazione del numero di microrganismi-Metodo di conteggio diretto al microscopio!
La crescita della popolazione batterica si manifesta con un aumento del numero di cellule o con un aumento del materiale cellulare. I metodi per determinare il numero di cellule comprendono la conta microscopica diretta, la conta su piastra, la stima della torbidità mediante spettrofotometro, il numero più probabile MPN e la filtrazione su membrana. (filtrazione su membrana) ecc. I metodi per misurare le sostanze cellulari comprendono la determinazione del peso secco delle cellule, la determinazione di alcuni componenti cellulari come il contenuto di azoto, il contenuto di RNA e DNA e la determinazione dei prodotti metabolitici. In breve, esistono molti metodi per misurare la crescita microbica, ciascuno con i propri vantaggi e svantaggi. Il metodo dovrebbe essere selezionato in base ai requisiti specifici del lavoro. Questo esperimento introduce principalmente il metodo di conteggio diretto al microscopio comunemente utilizzato nella produzione e nel lavoro di ricerca scientifica.
1. Requisiti dello scopo
1. Chiarire il principio del conteggio con una scheda per il conteggio delle cellule del sangue.
2. Padroneggiare il metodo di conteggio dei microrganismi utilizzando una scheda per il conteggio delle cellule del sangue.
2. Principi fondamentali
Il metodo di conteggio diretto al microscopio è un metodo semplice, veloce e intuitivo che posiziona una piccola quantità di sospensione del campione da testare su un vetrino speciale con un'area e un volume determinati (chiamato anche batteriometro) e lo conta direttamente al microscopio. Metodi. Attualmente, i batteriometri comunemente usati in patria e all'estero includono: emocitometro, batteriometro Peteroff-Hauser e batteriometro Hawksley, ecc. Possono tutti essere usati per contare lieviti, batteri, spore di muffe e altre sospensioni, e i principi di base sono gli stessi. Gli ultimi due contatori batterici hanno un volume totale di 0.02 mm3 dopo essere stati coperti con un vetrino coprioggetto e la distanza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino è di soli 0,02 mm. Pertanto, una lente dell'obiettivo a immersione in olio può essere utilizzata per osservare e rilevare cellule più piccole come i batteri. contare. Oltre all'utilizzo di questi batteriometri, esiste anche un metodo di stima che osserva direttamente al microscopio il rapporto tra l'area dello striscio e l'area del campo visivo. Questo metodo viene generalmente utilizzato per l'esame batteriologico del latte. I vantaggi del metodo di conteggio diretto al microscopio sono che è intuitivo, veloce e facile da usare. Tuttavia, lo svantaggio di questo metodo è che il risultato misurato è solitamente la somma di batteri morti e batteri vivi. Attualmente esistono alcuni metodi per superare questa lacuna, come la combinazione di batteri vitali che colorano la coltura della microcamera (breve tempo) e l'aggiunta di inibitori della divisione cellulare per raggiungere lo scopo di contare solo i batteri vitali.
Questo esperimento utilizza un emocitometro come esempio per condurre un conteggio diretto al microscopio. Per l'utilizzo degli altri due batteriometri fare riferimento alle istruzioni di ciascun produttore. Il conteggio diretto al microscopio utilizzando un emocitometro è un metodo di enumerazione microbica comunemente utilizzato. Il piano di conteggio è uno speciale scivolo con quattro scanalature che formano tre piattaforme; la piattaforma più ampia al centro è divisa in due metà da una breve scanalatura orizzontale e su ciascun lato della piattaforma è presente una griglia. Ogni griglia quadrata è divisa in nove grandi quadrati e il grande quadrato al centro è la stanza del conteggio. La struttura della scheda per il conteggio delle cellule del sangue è mostrata nella Figura {{0}}. Generalmente esistono due specifiche per la scala della camera di conteggio. Uno è un quadrato grande diviso in 25 quadrati medi, e ogni quadrato medio è diviso in 16 quadrati piccoli (Figura 15-2); l'altro è una grande piazza. La griglia quadrata è divisa in 16 quadrati medi e ogni quadrato medio è diviso in 25 quadrati piccoli. Tuttavia, indipendentemente dal tipo di tabellone per i conti, ci sono 400 quadrati piccoli in ogni quadrato grande. La lunghezza del lato di ciascun quadrato grande è lmm, quindi l'area di ciascun quadrato grande è lmm2. Una volta coperto il vetrino coprioggetto, l'altezza tra il vetrino coprioggetto e il vetrino è 0,1 mm, quindi il volume della camera di conteggio è 0,1 mm3 (un decimillesimo di millilitro). Figura 15-1 Struttura della tavola per il conteggio delle cellule del sangue (1) Figura 15-2 Struttura della tavola per il conteggio delle cellule del sangue (2) A. Vista frontale; B. Sezione longitudinale; griglia quadrata allargata, il grande quadrato al centro è la camera di conteggio 1. Pannello per il conteggio delle cellule del sangue; 2. Vetrino coprioggetto; 3. Quando si conta nella camera di conteggio, di solito si conta il numero totale di batteri in cinque quadrati, quindi si trova il valore medio di ciascun quadrato, quindi si moltiplica per 25 o 16 per ottenere Il numero totale di batteri in un quadrato grande viene quindi convertito nel numero totale di batteri in 1 ml di soluzione batterica. Supponiamo che il numero totale di batteri nei cinque quadrati centrali sia A e che il fattore di diluizione della soluzione batterica sia B. Se si tratta di una piastra di conteggio con 25 quadrati centrali, il numero totale di batteri in 1 ml di soluzione batterica {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (pezzi) Allo stesso modo, se si tratta di una piastra di conteggio con 16 quadrati, il numero totale di batteri in 1 ml di soluzione batterica {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (pezzi),,
