Microscopia biologica sul volume dei blocchi di tessuto
Biomicroscopia Ad oggi, la fissazione ghiacciata, le sezioni ultrasottili congelate e la manipolazione congelata a secco sono metodi di routine per microcampi a raggi X di tessuti e cellule. I dettagli del metodo sono spiegati nei seguenti punti:
Microscopi biologici I microscopi con lente condensatrice possono essere spostati su e giù per ottenere una luminosità moderata, oppure l'apertura dell'espansore di luce variabile può essere modificata per ottenere una luminosità moderata 9b. Se la luce è soleggiata, il telescopio può essere alzato in modo appropriato e l'apertura della luce variabile può essere ampliata in modo appropriato. Se la luce è troppo forte, lo specchio del faretto può essere abbassato in modo appropriato, l'apertura della luce variabile salta per una riduzione adeguata. Se in questo caso senti ancora abbagliamento, allora puoi scegliere il filtro apposito posizionato nella staffa sotto il riflettore. Questo può essere ottenuto per renderti soddisfatto della luminosità. Naturalmente nella regolazione delle posizioni superiore ed inferiore della lente condensatrice si può variare l'ampiezza dell'apertura di lettura della luce e la scelta dei filtri idonei, questo dopo un certo periodo di pratica ed esperienza.
Microscopio biologico Un aspetto molto importante è il processo di campionamento e separazione delle cellule, la liofilizzazione e l'inclusione in resina (FD) dopo il congelamento degli ultra-libretti, la liofilizzazione dopo l'analisi fine di ciascuna parte del contenuto della composizione elementare di 65 deve essere maneggiato con molta attenzione e non deve danneggiare le cellule da osservare e analizzare. Poiché l'analisi microareale a raggi X non richiede solo molti passaggi, e il costo è molto elevato, se dopo un lungo periodo e molteplici passaggi di lavorazione, le cellule analizzate sono cellule danneggiate o cellule morte, trarre conclusioni errate è molto deplorevole. Ad esempio, i cardiomiociti isolati mediante il trattamento con collagenasi hanno due morfologie, una lunga a forma di bastoncino e l'altra rotonda. Queste ultime sono cellule morenti che sono state danneggiate durante l'isolamento cellulare.
Biomicroscopia Il contenuto e la distribuzione degli elettroliti in questi due tipi di cellule sono molto diversi. Il Na era molto alto e il K molto basso nei cardiomiociti rotondi, mentre la concentrazione di Ca era molto alta nei mitocondri. Dopo aver controllato con altri metodi analitici, è stato dimostrato che l'alto Na e il basso K nelle cellule rotonde e l'alto Ca nei mitocondri erano il risultato di un danno alla membrana cellulare durante la separazione cellulare. La fissazione a freddo di cellule e tessuti viene spesso eseguita mediante fissazione mediante raffreddamento seguita dalla conservazione in azoto liquido. La fissazione del quench è importante per l'efficacia della conservazione. Le cellule vive o i tessuti freschi sono ricchi di acqua, quando si raffreddano spesso le cellule o i tessuti e l'agente freddo (soprattutto con azoto liquido puro freddo) entrano in contatto diretto con le parti del primo congelamento-fissazione, formando così un "guscio", che impedisce il fissaggio a freddo del centro della cellula. Di conseguenza, durante l’analisi microcellulare a raggi X si trovano spesso cristalli di ghiaccio al centro di cellule più grandi. Per evitare che ciò accada, come agenti refrigeranti vengono utilizzate sostanze con un punto di fusione superiore all'azoto liquido ma inferiore a 806°C secco. Esistono molte sostanze simili, ma * facile da ottenere, poco costoso è il propano concentrato (punto di ebollizione di 42,120 °C, punto di fusione di 187,10 °C, peso molecolare di 44,1), la velocità di raffreddamento * veloce. Ha però lo svantaggio di essere infiammabile.
Il microscopio biologico può essere posizionato su uno speciale ripiano della fibra muscolare, in modo che la contrazione della fibra muscolare per raggiungere una certa fase temporale debba essere fissata, avviare immediatamente l'ugello, in modo che il propano liquido arrivi al getto della fibra muscolare, in modo che l'estinzione della fibra muscolare il freddo riparato. Quindi la fibra muscolare viene estratta insieme al rack e messa in azoto liquido. Se si fissano cellule del sangue o cellule isolate, prima centrifugazione a bassa velocità per concentrare le cellule, le cellule verranno trasferite a una buona conduttività termica del tubo d'argento, il tubo nella carcassa di propano liquido fissato a freddo. Pancreas di ratto fisso da laboratorio nella sala, i primi due pezzi di acciaio con preraffreddamento di elio liquido (o azoto liquido), con un morsetto serrato i due pezzi di rame verranno posizionati davanti e dietro il pancreas, in modo che la zia del fissazione a freddo che disseta la ghiandola. I tessuti o le cellule possono essere conservati a lungo nell'azoto liquido dopo il raffreddamento e il fissaggio.
