Applicazione ed utilizzo dei principi del microscopio a fluorescenza
Principi e caratteristiche strutturali dei microscopi a fluorescenza: I microscopi a fluorescenza utilizzano una sorgente luminosa puntiforme con elevata efficienza luminosa per emettere luce di una determinata lunghezza d'onda (come luce ultravioletta 3650 pollici o luce viola-blu 4200 pollici) attraverso un sistema di filtri colorati come luce di eccitazione per eccitare la fluorescenza nel campione. Dopo che la sostanza emette fluorescenza di vari colori, viene quindi osservata attraverso l'ingrandimento della lente dell'obiettivo e dell'oculare. In questo modo, sotto uno sfondo fortemente contrastante, anche se la fluorescenza è molto debole, è facile da identificare ed ha un'elevata sensibilità. Viene utilizzato principalmente per lo studio della struttura e della funzione cellulare, nonché della composizione chimica. La struttura di base di un microscopio a fluorescenza è composta da un normale microscopio ottico più alcuni accessori (come sorgente luminosa a fluorescenza, filtro di eccitazione, divisore di fascio a due colori, filtro di blocco, ecc.). Sorgente luminosa fluorescente: utilizza generalmente una lampada al mercurio ad altissima pressione (da 50 a 200 W), che può emettere luce di varie lunghezze d'onda, ma ciascuna sostanza fluorescente ha una lunghezza d'onda di eccitazione che produce la fluorescenza più forte, quindi un filtro di eccitazione (generalmente esistono filtri di eccitazione ultravioletti, viola, blu e verdi), che consentono solo alla luce di eccitazione di una certa lunghezza d'onda di passare attraverso e illuminare il campione, assorbendo tutta l'altra luce. Dopo che ciascuna sostanza è stata irradiata dalla luce di eccitazione, emette una fluorescenza visibile con una lunghezza d'onda maggiore della lunghezza d'onda di irradiazione in un tempo molto breve. La fluorescenza è specifica ed è generalmente più debole della luce di eccitazione. Per osservare la fluorescenza specifica, è necessario un filtro bloccante (o soppressore) dietro la lente dell'obiettivo. Ha due funzioni: una è assorbire e impedire alla luce di eccitazione di entrare nell'oculare per evitare di disturbare la fluorescenza e danneggiare gli occhi; l'altro è selezionare e consentire il passaggio di una fluorescenza specifica per mostrare un colore di fluorescenza specifico. I due filtri devono essere selezionati e utilizzati insieme.
